Toepassingsvoorbeeld
Een cytotoxische respons in de tijd volgen
Een eindpunt kan verhullen wanneer een behandelrespons begint. Dit gedocumenteerde experiment met HeLa-cellen combineerde helderveld en groene fluorescentie tijdens blootstelling aan nocodazol om veranderingen in celbedekking en membraanintegriteit gedurende 48 uur te volgen.
Bespreek uw experiment →
Gerapporteerde proefopzet
- Monster
- HeLa-cellen uitgezaaid met 1 × 10⁴ cellen per well in een 48-wellsplaat en vóór behandeling een nacht gekweekt.
- Behandeling in de bronfiguren
- Onbehandelde controle en nocodazol bij 31,25, 62,5 en 250 nM.
- Acquisitie
- Helderveld en groene fluorescentie ieder uur gedurende 48 uur in een incubator.
- Uitlezing
- Kleurstof voor membraanintegriteit; fluorescent oppervlak ten opzichte van helderveldconfluentie, gerapporteerd als percentage.
- 1
Tel cellen en zaai consistent uit
- 2
Neem gekoppelde helderveld- en fluorescentiebeelden op
- 3
Beoordeel morfologie en de fluorescentie-/confluentie-uitlezing
Wat is gerapporteerd
De notitie rapporteert concentratieafhankelijke morfologische veranderingen en afnemende helderveldconfluentie, samen met toenemende fluorescentie van cellen met aangetaste membranen in de tijd. De combinatie van kanalen geeft context aan het responsverloop in plaats van alleen een eindwaarde van fluorescentie te gebruiken.
Grenzen van de interpretatie
Een oppervlakteverhouding is niet automatisch het percentage dode cellen: celgrootte, loslaten, overlap en segmentatie beïnvloeden de uitkomst. Een kleurstof voor membraanintegriteit toont op zichzelf geen apoptosemechanisme aan. Controleer kleurstofcompatibiliteit, achtergrond, fototoxiciteit en passende controles voor uw cellen. Uit deze samenvatting worden geen IC50, universele detectielimiet of onafhankelijke validatie afgeleid.
Specificeer beeldvorming en telling samen
Het voorbeeld gebruikt een compacte gemotoriseerde imager met helderveld en een groene fluorescentie-uitvoering. Controleer het exacte kleurstofspectrum tegen de filterset en test een belichtingsschema op uw cellen. Het gerapporteerde interval van één uur is een experimentele instelling, geen vereiste voor alle cytotoxiciteitsassays.
Een reproduceerbare beginsuspensie is al vóór de beeldvorming belangrijk. Een passende helderveldteller kan de uitzaaistap ondersteunen, terwijl de imager de aangehechte kweek in de tijd volgt. Deze instrumenten rapporteren verschillende grootheden. Vergelijk celconcentratie en levensvatbaarheid vóór uitzaaien afzonderlijk van beeldgebaseerde confluentie en fluorescentie na hechting.
Instrumenten voor deze workflow
Controleer de exacte uitvoering en assaycompatibiliteit op de productpagina. Vermelding is geen validatie voor ieder monster.
Bronnen en reikwijdte
Eigen samenvatting van een instrumenttoepassingsnotitie uit 2022 over nocodazol-geïnduceerde cytotoxiciteit. Een gerapporteerd experimenteel voorbeeld, geen onafhankelijke validatie of door Precisometer uitgevoerd onderzoek. Er zijn hier geen experimentele beelden of curven uit die notitie overgenomen.
Gegevens voor de instrumentkeuze
- Celtype, uitzaaidichtheid, kweekvat en behandelingen
- Fluorofoor, controles en gewenste uitlezing
- Beeldposities, interval en blootstellingsduur
Bespreek uw experiment
Geef aan wat u wilt meten. In de volgende stap voegt u uw contactgegevens toe en controleert u de aanvraag vóór verzending.
Selectiehulp en toepassingen
Beeldvormingssystemen vergelijken
Een beeldvormingssysteem voor levende cellen kiezen →
Vergelijk zes beeldvormingssystemen op kweekvaten, objectieven, fluorescentie en incubatorruimte en bepaal de uitvoering voor uw experiment.
Gids voor celtelling
Een celteller voor celkweek kiezen →
Kies een telmethode op basis van celtype, concentratie, levensvatbaarheidskleuring en monsteraanbod. Vergelijk tellers en plan een evaluatie met uw eigen monsters.
Toepassingsvoorbeeld
Wondsluiting volgen met time-lapsebeeldvorming →
Een gedocumenteerde scratch-assay met NIH-3T3-cellen: helderveldbeelden om de 30 minuten gedurende 72 uur, wondoppervlakteanalyse en interpretatiegrenzen.